高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱；过滤流动相和样品；净化样品；避免过高的柱压；注意温度和酸碱度；正确及时的冲洗等。

保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”，同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。

尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器，但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染，因此，加装保护柱是必要的，特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。

保护柱填料应与分析柱一致，粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品，经过一定次数的样品分析(50～100次)后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换保护柱。

流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成，原则上，所有经过色谱柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况而有所区别：当有机溶剂用色谱纯级，水用石英亚沸水或其它超纯水时，在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时，过滤并无更多实际意义。

当流动相中含有缓冲盐时，则过滤是必要的，如前所述，当缓冲溶液放置一段时间（视环境温度不同而异，夏季一般不超过48h，冬季一般不超过一周）后，在使用前还应重新过滤。

所配制的样品试液在注入流路系统前均要经0. 45μm ( 0. 22μm则更好）孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系，二者不可混用，以防止滤膜溶解而造成污染。

装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换，以避免滤器因过载而起不到过滤作用。

当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分，如产生永久性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质，以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯，以除去多余杂质组分。

虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6000psi （磅/平方英寸），但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命。避免此情况的发生，应注意以下几点：

（1）柱压过高时，尽可能采用较小的流速，以不超过柱最大允许压力的一半为宜。

（2）当流速较大时，应采取流速梯度的办法使流速分步到位。

（3）使用手动进样阀时，进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时，柱切换要避免在高压下进行。

一般以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。

温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解，从而使填料性质改变，柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。

目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10，但在实际使用时应避免极端的pH条件，特别是在偏碱性的条件（pH≥8）下使用，如必须要在极端的pH条件下使用时，可通过以下方法避免柱损害：

（1）在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相；

（2）降低使用温度；

（3）检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”彻底清洗。

06.正确及时的冲洗

开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱，如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶，如不能混溶，要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。